JM110/trans110

JM110 Chemically Competent Cell 产品说明书

产品规格（CAT#: DL1025）

JM110：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期)：                            -80℃（6个月） 

基因型

rpsL (Str^R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacI^qlacZΔM15] 

产品说明

JM110菌株具有硫酸链霉素抗性(Str^R)；是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，提取得到的质粒DNA，可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割；lacI^qlacZΔM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选，但转化效率不高，一般不用于质粒构建，只适用于质粒转化。JM110感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率约10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. JM110感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。