成管实验

一、实验简介

血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用。小管形成实验是测量在体外血管生成的一种快速的、可量化的方法。一般做的多的是研究内皮细胞的小管形成。内皮细胞结合条件培养基接种于一定基底上，易形成三维网状结构。然后通过图像分析软件对小管结果进行定量分析。

二、实验步骤

1、将24孔板和1ml的枪头放置冰箱或冰上预冷20-30min，从-20℃冰箱中取出Matrigel基质胶，将其置于4℃冰箱待其融化。

2、铺胶：取250 μl/孔Matrigel基质胶加入24孔板中，加入时避免产生气泡，置于细胞培养箱中60min待其凝固。

3、加入1ml 含EDTA的胰酶消化细胞，待消化完全后，加入含血清培养液终止消化，计数后用培养基重悬细胞并调整细胞密度为2-3×10⁵个/ml。

4、待胶凝固后，取出24孔板，每孔加入500μl细胞悬液，做好标记后放入细胞培养箱常规培养4-6h。

5、100、200倍显微镜下随机5个视野观察计数血管内皮细胞小管分枝、小管数、小管长度等。统计各组间差异。