Transporter 5 Transfection Reagent 26008

产品简介

Transporter 5转染试剂是一种非GMP等级的即用型线性聚乙烯亚胺（PEI转染试剂）溶液，由PEI MAX配置而成，采用0.1um PES无菌过滤器，完全消除支原体污染风险。Transporter 5将DNA缩聚成带正电荷的复合物，这些复合物很容易通过内吞作用进入细胞，并且Transporter 5-DNA 复合物能很好地抵御溶酶体的降解作用，有效提高转染效率。适用于工艺开发、临床前和早期临床研究，可无缝过渡到MAXgene GMP用于商业化生产。

Transporter 5转染试剂能高效地将DNA转染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆虫（SF9、SF21） 等真核细胞系，可作用于大到135,000个核苷酸的质粒，所以较大的质粒也可以成功地转染。 

Transporter 5可节省试剂准备时间，加快项目进度。经过严格的性能检测，确保品质，在新药研发过程中是一款快速、重复性好、可用于批量产的转染试剂。

产品特点

l非GMP，研究级PEI转染试剂溶液

l高转染效率

l无缝过渡到MAXgene GMP

l易放大，可预测产量

l用于工艺开发，临床前和早期临床研究

转染示意图

含血清培养的贴壁细胞转染流程

1. 准备工作

• 转染前 18~24 小时细胞铺板。

• 在培养基中加入合适数量的细胞，以确保在转染前形成 60~80%汇合度的单细胞层，此为最理想的细胞转染密度。

各规格培养容器中贴壁细胞铺板密度参考表

2. 转染步骤（以 6 孔板单孔举例）

• 转染前 1~2 小时，将需要转染的孔中的培养基替换成 3 mL 新鲜的含有2%低血清或无血清的培养基。（高浓度血清抑制 Transporter 5 的性能，大多数情况下，较低的血清含量(≤ 5%)或无血清将获得较高的转染效率）。

• 准备Transporter 5-DNA 转染混合物（以下操作顺序尤为关键）。

1) 在含有300uL（3mL的10%）稀释液的聚丙烯 EP 管中加入 2ug质粒 DNA；

2) 轻轻地混匀/振荡溶液；

3) 在 DNA 溶液中加入 2~8 uL Transporter 5 转染试剂（Transporter 5-DNA 的比例建议在 1~4：1 之间优化，首次推荐使用 2：1 或 3：1）；

4) 涡旋振荡 5 秒钟；

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟，使 Transporter 5-DNA 复合物形成（建议共孵育时间不超过 20 分钟）；

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次

• 边晃动细胞培养板，边将 Transporter 5-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保 Transporter 5-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。

3. 孵育培养

  • 将细胞培养板放入培养箱培养 18~24小时后，更换含有血清的正常培养基；

  • 通常，在转染后 36-48 小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒，转染后 72-96 小时可观察到最大产量。

经过驯化的无血清培养悬浮细胞转染流程

1.准备工作

 转染前 2~3 小时，种植细胞密度为 1X10⁶ /mL 于培养容器中。

2. 转染步骤（以 250 mL 摇瓶为例，转染前种植细胞总体积为 25 mL，最终总培养体积为 50 mL）

准备 Transporter 5-DNA 转染混合物（以下操作顺序尤为关键）。

1)在含有 2.5 mL（25mL 的 10%）稀释液的聚丙烯 EP 管中加入 50ug 质粒 DNA（质粒用量建议在 1~2ug/106 细胞之间优化，此处使用 2ug/10⁶ 细胞）

2) 轻轻地混匀/振荡溶液

3) 在 DNA 溶液中加入 50~200uL Transporter 5 转染试剂（Transporter 5/DNA 的比例建议在 1~4：1 之间优化，首次推荐使用 2：1 或 3：1）

4) 涡旋振荡 5 秒钟

5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟，使 Transporter 5-DNA 复合物形成（建议共孵育时间不超过 20 分钟）

6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次

注：边晃动摇瓶，边将 Transporter 5-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保Transporter 5-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。

3. 孵育培养

将细胞培养瓶放入培养箱，摇瓶培养 2~3 小时后，加入 25 mL 新鲜培养基，继续培养。

通常，在转染后 36-48 小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒。转染后 72-96 小时可观察到最大产量。