简介：
细胞培养物污染往往是细胞培养实验室最常遇到的问题，有时会带来十分严重的后果。生物污染物为其主要污染种类之一，例如细菌、霉菌、真菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。尽管无法彻底消除污染，但是可以通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术，降低污染发生的频率和严重程度。现对几种常见的生物污染进行介绍 细菌 细菌是一大类广泛存在的单细胞微生物。细菌直径一般为几个微米，形态多样，例如：球状、杆状和螺旋状。细菌由于分布广泛、生长迅速以及体积微小的特点，与酵母和霉菌等一起构成了细胞培养中最常遇到的生物污染。培养物被细菌污染后，几天内即可通过简单的肉眼观察发现；被污染的培养物通常呈云雾状（肉眼观察为浑浊状态），有时表面覆盖一层薄膜。另外，经常还会发现培养基的PH值突然降低，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。低倍镜下观察，可见细菌为细胞之间移动的微小颗粒；高倍镜下则可以分辨出细菌的具体形态。 霉菌 霉菌是真菌值界的一种真核微生物，以被称为菌丝的多细胞丝状体形式生长。这种多细胞丝状体构成的交联网络含有遗传性相同的细胞核，被称为集落或者菌丝体。与酵母污染类似，霉菌初期培养物PH值会维持稳定，培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天仍清亮，污染加重后PH值会迅速升高，培养物变浑浊，出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差。在显微镜下，菌丝体通常呈细束状纤维，有时呈较为密集的孢子团块。许多种霉菌的孢子在休眠期均可耐受极端严峻、不利的环境，当其遇到合适的生长条件时才会被活化。 酵母 酵母是真菌界的一种单细胞真核微生物，为肉眼不可见的微小单细胞微生物，大小在几微米（多见）到40微米（罕见）不等，与细菌污染类似，培养物被酵母污染后也会变得浑浊，特别是进入污染后期，培养物被酵母污染后PH值变化极小，污染严重时PH值才会升高。 显微镜下观察，酵母呈单个卵圆形或球形颗粒，有些还会芽生出较小的酵母颗粒。 真菌 真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。真菌污染一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，像珊瑚状，不像细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。 真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。 病毒 病毒是一种微观感染性物质，利用宿主细胞结构进行复制，病毒体积微小，因而要检测培养物中有无病毒以及将其从细胞培养实验室所用试剂中去除都十分困难。由于大多数病毒对宿主有非常严格的要求，因此一般不会对其宿主五种不同的细胞培养物造成不良影响。但是使用病毒感染的细胞培养物食却会对实验室工作人员造成严重的健康威胁。特别是当实验室培养的是人或灵长类动物细胞时，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色、ELISA实验或者采用适当病毒引物的pcr技术可以检测出细胞培养物中的病毒污染。 支原体 支原体是一种没有细胞壁的简单细菌，被认为是能够自我复制的最小的生物。由于体积极小，一般小于1微米，支原体的检测十分困难，除非其达到极高的密度，导致细胞培养物变质。在此之前往往没有明显的感染征象，有些生长缓慢的支原体可能会在培养物中持续存在，而不会导致细胞死亡。但是这些支原体会改变培养体系中主细胞的行为和代谢。慢性支原体感染可能包括：细胞增殖速度降低，饱和密度下降以及悬浮培养物凝集，但是唯一切实有效的检测支原体污染的方法就是采用荧光染色、ELISA、PCR、免疫染色、放射自显影或者微生物学测定技术定期检测培养物。 支原体清除剂 交叉感染 由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染，目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。虽然不如微生物污染普遍，但是许多细胞系与Hela细胞及其他生长迅速的细胞系间广泛的交叉污染是一个明确的问题，会造成严重的结果。从比较靠谱的细胞库获取细胞系、定期检查细胞系的性质以及采用良好的无菌技术是有助于避免交叉污染的惯例方法。通过DNA指纹图谱、核型分析和同位素分析可以确认细胞培养物有无交叉污染。 细胞系鉴定（STR）服务： STR（Short TandemRepeat，短串联重复序列）基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定 。 细胞生物学研究状况细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物发，然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代 。 在细胞生物学领域，文章一直在发表，科研成果一直在公布，但是当中哺乳动物细胞被错误鉴定，存在交叉污染的情况也同时存在着。
