概述

BE-TRANSFLOW是一种用于仿生条件下细胞培养的多功能微流控芯片。它允许2D-3D组织培养与建立流动和气液界面 (ALI)的可能性相结合。仿生学微型芯片在体外复制不同的组织 结构。 典型应用实例有免疫系统体外模型、肿瘤转移体外模型、 皮肤和肠道芯片模型。

材质

BE-TRANSFLOW芯片由生物相容性材料制成，且气体不渗透，可以有效地梯度控制CO2、O2等。具有良好的光学性能， 具有高透明度和低自荧光。

技术特点

BE-TRANSFLOW芯片包含两个独立的孔，孔底为多孔膜。 多孔膜与底层通道相连。带有螺旋状的进口和出口储液池，用 于连接接头和毛细管路。防蒸发储液池位于培养液储液池旁边， 培养期间，毛细管封闭系统之前，将PBS或水灌满防蒸发储液池。

产品经过消毒(每盒10片)。常温(15-25℃)下，避免阳光直射，干燥处存放。

细胞培养涂层

BE-TRANSFLOW芯片经过处理，表面亲水，便于用水溶液和/或凝胶填充，以促进细胞粘附。

如果需要特定包被涂层，根据厂家的说明准备涂层溶液(Collagen I, Collagen IV, Fibronectin, Poly-L-Lysine, Poly-D-Lysine…)并应用到每个通道。 吸出涂层溶液，使用通道体积5-10倍的蒸馏水或PBS洗涤，去除多余的涂 层溶液。

填充和处理 1. 对细胞进行胰蛋白酶裂解和计数。细胞浓度随细胞类型而变化。

建议在2-3天内接种细胞以获得融合层。 2. 接种细胞。支持单分子层、水凝胶或两者同时接种。 2A. 在膜上方的通道中接种细胞。 2B. 在膜下接种单层细胞。将下层通道填满细胞，并将其翻转， 促进细胞附着。如果进行此实验验，首先在底层通道中接种细胞， 当细胞成功附着后，翻转芯片并继续按照协议在上面的通道中接 种细胞。 用P-100或P-1000移液管取100 μL带细胞的培养液，加到进样口。 培养液通过通道流到出口。注意将进口(1)填满，出口(2)空出，压 力差将平衡进口和出口之间的培养液。在防蒸发储液池中加水或 PBS以避免蒸发。

3. 细胞粘附于表面(时间因细胞类型而异)。 4. 如果不连接流体控制系统，请在培养液储液池中添加所需的培养 液。为此，在进口旁边的培养液储液池中小心地添加培养液，压 力差将平衡进口和出口之间的培养液。 5. 如果连接流体控制系统，将接头接在出口和进口(按此顺序)。入 口和出口设计为标准连接(UNF 1/4”- 28)。请记住，在连接设备和 毛细管之前，须先将储液池填充。 也可以用摇床把介质从一个储液池移到另一个储液池。当每个储液池 的最终体积为100 μl时，可以施加45°倾角。

流体控制系统的配置

Beonchip对流体控制系统的配置提出了一些建议。 前处理: 1. 在培养箱中预热毛细管和流体控制元件15-20分钟。 2. 将系统放置在超净台中。 3. 在安装流体控制系统之前，细胞须良好地粘附在表面。

4. 芯片内部或入口/出口需要填充满培养液。 组装流体控制系统，需考虑以下事项: 1. 将入口完全填满培养液，防止有气泡残留。 2. 在组装系统之前，先将连接到入口的毛细管准备好。 3. 入口和出口都连接标准接头(UNF 1/4”- 28)。当系统准备好，将接 头连接在进口。过程中须非常小心，以确保没有气泡进入系统。 4. 将毛细管连接到出口，封闭系统。 5. 检查系统是否有泄漏。在将系统放入生物反应柜或培养箱之前， 让泵运行几分钟。 注意：为防止过程中产生气泡，请避免将移液管尖端完全倒空。当从吸液口移开 移液管时，紧紧握住柱塞，以免负压将溶液吸走。 细胞接种 下面是应用实例，以便更好地理解该芯片。 芯片可以进行单培养或共培养。在膜上和/或下接种不同类型的细胞 单分子层(1和2)。为了更实际的分析，可以在膜上添加水凝胶细胞培养物 (3)。

细胞显微观察的准备

可监测固定的或活的细胞和化学梯度。传统细胞培养中使用的大多数 监测系统都可以用于BEONCHIP微流控芯片。常用的固定物也可用。细胞活力可以用不同的染料来评估。此外，免疫荧光染色可识别特异性靶点。 细胞周期荧光记录仪也可以使用。